大鼠脑卒中（脑缺血再灌注）模型相关药效实验整体解决方案 

「脑卒中」又称「中风」、「脑血管意外」。是一种急性脑血管疾病，是由于脑部血管突然破裂或因血管阻塞导致血液不能流入大脑而引起脑组织损伤的一组疾病。而大鼠脑卒中模型就是通过手术的方式，人为的使大鼠患脑卒中，然后研究药物对大鼠的作用机制以及治疗效果。

模型制备方法：

1、实验动物：雄性 SD 大鼠                        
体重：180～200 g                       
周龄：6～7 周                        
动物等级：SPF 级

2、实验方法：大鼠在实验前一天禁食一晚，麻醉后呈仰卧位固定于手术板上，颈部纵行切口约 3 cm，暴露并钝性游离颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA)、颈内动脉（ICA)，于颈总动脉（CCA）近心端打活结暂时阻断血供，颈外动脉（ECA) 打双结并在双结中间用显微剪剪开小口穿入线栓，从双结中间离断颈外动脉（ECA)，调整线栓方向使之进入颈内动脉（ICA)，以颈内动脉（ICA) 和颈外动脉（ECA) 分叉处为参考位置，线栓插入到预设刻度，感到阻力，提示线栓头部已到达大脑中动脉（MCA），打结固定线栓。缺血时间 30-90 min，将线栓拔出，松掉颈总动脉活结，完成。      

3、实验周期：1-7 天 

 

神经功能评分：

以 Longa5 分法为评分标准 
0 分   无神经 缺 损症 ；
1 分   提尾时瘫侧前肢 内收 ，不能全伸直 ；
2 分   向瘫侧旋转  
3 分   行走时向瘫侧倾倒 ，
4 分   不能行走或昏迷 。
结果：术后 24 小时进行评分，1-3 分 为有效模型 。4 分、0 分为无效。




TTC 染色 
1、原理：与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。
2、染色方法：取血后立即从左心室插管 ，快速灌注生理盐水冲洗 2 min，断头取脑作 TTC 染色 ，将大脑从前往 后切成 5-7 个冠状切片 ，片厚度约为 1.8 mm，用 1% TTC 于 37℃ 染色 10 min 后 ，用组织固定液固定后应用扫描仪进行扫描。并用分析软件进行分析。




激光散斑血流成像（LSCI）        
基于激光多普勒技术通过低能量激光束对脑部扫描成像，评估脑缺血程度。



给药及评价 
1、颅内注射给药 
2、大、小鼠行为学检测 
3、灌胃、腹腔、尾静脉等多途径给药 眼底静脉丛采血 
4、小动物核磁成像 
5、脑 TTC 染色，计算梗死面积 
6、灌注取脑，
7、病理切片 HE 染色、尼氏染色、LFB 髓鞘染色 
8、病理读片，损伤评级 
9、免疫组化、免疫荧光、细胞凋亡（Tunel）
10、相关基因、蛋白分析。WB、QPCR。


实验模型导图